Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики TORCH- инфекции Лектор: к.б.н. Алламиярова Светлана Афанасьевна

TORCH В 1997 г. на 27 международном конгрессе в Испании в группу TORCH-инфекции было решено включить: Т-токсоплазмоз О-other infections –урогенитальный хламидиоз и уреаплазмоз R- (Rubella)- краснуху C-цитомегаловирусную инфекцию Н-герпетическую инфекцию вирусами Herpes I-II В последние годы в эту группу относят также: сифилис, гепатиты B и С, ВИЧ инфекцию и др..

Методы лабораторной диагностики инфекций Прямые – обнаружение и выделение возбудителя. Косвенные – обнаружение специфических антител

Прямые методы цитология (микроскопия) мазка - выявление возбудителя в нативном или окрашенном мазке; посев на соответствующую среду с выделением возбудителя в бактериальной культуре или культуре тканей прямая иммунофлюресценция (ПИФ) с помощью моноклональных антител иммуноферментный анализ (ИФА) для выявления возбудителя полимеразная цепная реакция (ПЦР) с обнаружением ДНК или РНК возбудителя.

Цитология (микроскопия мазка из 3-х точек) Преимущества: доступность, низкая себестоимость, быстрота Недостатки: отсутствие объективности, необходимость высокой квалификации специалиста, ограниченный спектр выявления возбудителя (вирусы, хламидия, уреаплазма, микоплазма, гарднерелла

Бактериология (бак.посевы) Преимущества: основной критерий подтверждения диагноза, возможность определения чувствительности к лекарственным препаратам. Недостатки: дороговизна, длительность исполнения, необходимость специальных сред и условий, невозможность выделения в чистой культуре многих возбудителей (анаэробные инфекции, вирусы, хламидии, микоплазмы и др.)

Прямая флюоресценция Преимущества: Высокая информативность и специфичность Быстрота исполнения Недостатки: Необходимость наличия специального оборудования и материалов( специфические моноклональные флюоресцирующие антитела) Высокая квалификация специалиста

Иммуноферментный анализ для обнаружения возбудителя Преимущества: Высокая информативность, чувствительность и специфичность Недостатки: Необходимость наличия специальных материалов и оборудования Наличие квалифицированного персонала

Полимеразная цепная реакция Преимущества: Высокая информативность, чувствительность и специфичность Недостатки: Необходимость наличия специальных материалов и оборудования Наличие квалифицированного персонала Необходимость строго соблюдения технологии ПЦР во избежание получения ложноположительных результатов

Непрямые методы Различные варианты реакции агглютинации и преципитации (РГА, РПГА, РОПГА, РГАЭР и т.п.) Реакция связывания комплемента (РСК) Иммуноферментный анализ (ИФА) с определением IgM, IgA, IgG.

Реакции агглютинации, преципитации и связывания комплемента Преимущества: Быстрота, низкая стоимость, доступность. Недостатки: Низкая специфичность Визуальная оценка Определение общего пула всех классов иммуноглобулинов

Основные классы иммуноглобулинов Иммуноглобулин М (IgM) Иммуноглобулин А (IgА) Иммуноглобулин G (IgG)

Характеристика Ig MIg AIg G Молекулярная масса (дальтон) Д Д Д Концентрация в сыворотке (норма) 0,5 –2 мг/мл 5-10 % всех Ig сыворотки 1,4-4 мг/мл 10% всех Ig сыворотки 8-16 мг/мл 70-80% всех Ig сыворотки Прохождение через плаценту Не проходят Проходят Сроки проявления в сыворотке при иммунном ответе Ранние определяются на 7-8 день, короткоживущие, сменяются на Ig G день с момента заболевания день заболевания, поддерживают стерильный иммунитет в течение жизни. Биологическая роль в организме Их наличие подтверждает первичную инфекцию, острый и рецидивирующий процесс. Наличие Ig A в сыворотке - свидетельство активного острого процесса. Исчезновение после лечения - критерий излеченности. Наличие в сыворотке – показатель иммунитета, активного или хронического процесса в зависимости от количественного уровня антител и их динамики.

Иммуноферментный анализ Преимущества: Высокая специфичность (возможность определения отдельных классов Ig) Надежность Доступность Объективность оценки результата Недостатки: Необходимость наличия специальных материалов и оборудования Наличие квалифицированного персонала

Токсоплазмоз ( Toxoplazma gondii ) Прямые методы: ПЦР – в биологических жидкостях или биоптатах Непрямые методы: РСК – с токсоплазмином ИФА – определение отдельных классов Ig

Ig MIgGИнтерпретация результатов -- Отсутствие иммунитета. Для беременных - лабораторный контроль в динамике +- Низкий титр Недавнее инфицирование, острый процесс. В 1 триместре беременности рекомендован аборт. IgM – подтверждение токсоплазмоза у новорожденных -+ Хроническое носительство токсоплазмы. При наличии клинических проявлений - необходимость лечения. После лечения – наличие иммунитета. Если инфицированность до наступления беременности и клинических проявлений нет, лечение не проводится. Беременным необходимо определять IgM ++ Обострение токсоплазмоза – необходимость лечения. Дети с врожденным токсоплазмозом от инфицированных матерей

ХЛАМИДИОЗ ( Chlamydia Trachomatis ) Лабораторная диагностика хламидийной инфекции включает: Прямые методы обнаружения возбудителя: иммунофлюоресцентная микроскопия мазка с моноклональными антителами, меченными флуоресцеином (ПИФ) ПЦР Непрямые (серологические) методы диагностики: реакция прямой гемагглютинации эритроцитов больного с хламидийным диагностику лом (РПГА) – низкая чувствительность ИФА на наличие в сыворотке специфических антихламидийных антител – ранних (IgM,IgA), более поздних – IgG

ИФА IgG, IgA отрицательный положительный Клинические проявления ПИФ или ПЦР Неспецифиче ское лечение Динамическое наблюдение: IgG, IgA ПИФ ПЦР Специфическое лечение Контроль через 6-8 недель Прекращение наблюдения Клинические проявления отрицательный положительный нет есть

ИФА IgG ИФА IgA ПЦР Клинические проявления Прекращение наблюдение Динамическое наблюдение Повторный курс лечения Критерий излеченности

Уреаплазма ( Ureaplasma urealitica) Прямые методы обнаружения возбудителя уреаплазмы: ПЦР ИФА ПИФ Непрямой метод – обнаружение антител.

Ig M IgG Интерпретация результатов -- Отсутствие заболевания. -+ Носительство уреаплазмы или иммунитет к перенесенному заболеванию. При наличии клиники и 4- х кратного увеличения титра антител в тесте парных сывороток- необходимость лечения. +- Первая встреча организма с уреаплазмой, первичное заражение. ++ Реинфекция или начало выработки долговременного иммунитета при первичном заражении.

КРАСНУХА – RUBELLA Ig M Ig G Интерпретация результатов -- Отсутствие иммунитета, необходимость прививки. - +Иммунитет. В настоящий момент прививка не нужна. +-Острая краснуха, ранний период.

ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ (ЦМВ-CMV) В лабораторной диагностике ЦМВ используют: выявление вирусных антигенов – ИФА определение вирусных нуклеиновых кислот – ПЦР определение специфических иммуноглобулинов (IgG, IgМ) к ЦМВ.

IgMIgGИнтерпретация результатов -- Отсутствие иммунитета к вирусу. Потенциально опасная ситуация при планировании и во время беременности – опасность первичного инфицирования. Особенно опасно отсутствие антител ко всем типам вируса. -+ Самая благоприятная ситуация. Наличие иммунитета, нет риска первичного заражения, риск рецидива зависит от состояния иммунной системы, поддается профилактике и не представляет большой опасности для плода. +- Первичное инфицирование. Во время беременности и у новорожденного требует срочного лечения. Во время планирования беременности требует отсрочки зачатия до формирования иммунитета и исчезновения IgM. ++ Рецидив. Не создает такой угрозы для плода, как первичное, однако все равно требует лечения.

Вирус простого герпеса Herpes simplex virus (HSV I-II) (ВПГ I-II) ПИФ (прямая флуоресценция мазка с материалом от больного) ПЦР (выявление ДНК возбудителя) ИФА (выявление антигенов вируса) Серологический метод диагностики (непрямой) обнаруживает в ИФА антитела к Herpes simplex virus (HSV I-II):

IgMIgGИнтерпретация результатов -- Отсутствие иммунитета к вирусу. Потенциально опасная ситуация при планировании и во время беременности – опасность первичного инфицирования. Особенно опасно отсутствие антител ко всем типам вируса. -+ Самая благоприятная ситуация. Наличие иммунитета, нет риска первичного заражения, риск рецидива зависит от состояния иммунной системы, поддается профилактике и не представляет большой опасности для плода. +- Первичное инфицирование. Во время беременности и у новорожденного требует срочного лечения. Во время планирования беременности требует отсрочки зачатия до формирования иммунитета и исчезновения IgM. ++ Рецидив. Не создает такой угрозы для плода, как первичное, однако все равно требует лечения.

Ни в коем случае однократное определение IgG к HSV и CMV в сыворотке не может считаться показателем заболевания, так как IgG обнаруживаются у % обследуемых!

Тест парных сывороток Анализ 1 IgG Анализ 2 IgG 2 недели 4-х кратное увеличение титра

Основные правила трактовки лабораторных результатов Ни один тест не является универсальным; Собрать максимальный объем взаимодополняющих тестов (прямых и непрямых); Значение контроля в ИФА нельзя трактовать как физиологическую норму; Рассматривать результаты в обязательном сочетании с анамнезом, клиникой, фазой заболевания и с особенностями иммунитета при каждом заболевании.