Бруцеллёз, Туляремия Бруцеллёз, Туляремия

Классификация возбудителей бруцеллёза 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Brucella виды: B. melitensis (95 – 97% случаев в РФ) B. abortus B. suis B. neotomae B. ovis B. canis виды делятся на биовары 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Brucella виды: B. melitensis (95 – 97% случаев в РФ) B. abortus B. suis B. neotomae B. ovis B. canis виды делятся на биовары

Морфологические и тинкториальные свойства Мелкие коккобактерии Грамотрицательные Образуют микрокапсулу Неподвижны Спор не образуют

Культуральные свойства прихотливы, на простых средах не растут в первых генерациях размножаются медленно (1 – 3 недели) печеночные среды (бульон и агар) кровяные и сывороточные среды в бульоне – равномерное помутнение на агаре – сероватые, мелкие, выпуклые, блестящие колонии (S-формы) B. abortus требует 5 – 10 % СО 2

Биохимические свойства ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты без газа не образуют индол для B. abortus образование H 2 S вариабельно B. melitensis не образует H 2 S B. suis образует H 2 S Антигенные свойства О-антиген (ЛПС)

Классификация возбудителей бруцеллёза 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Brucella виды: B. melitensis (95 – 97% случаев в РФ) B. abortus B. suis B. neotomae B. ovis B. canis виды делятся на биовары 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Brucella виды: B. melitensis (95 – 97% случаев в РФ) B. abortus B. suis B. neotomae B. ovis B. canis виды делятся на биовары

Эпидемиология Источник B. abortus – крупный рогатый скот

Источник B. melitensis – мелкий рогатый скот (овцы, козы)

Источник B. suis – свиньи

Эпидемиология Пути передачи: – алиментарный – через мясо, непастеризованное молоко и молочные продукты (например, сыр брынза) – контактный – аэрогенный

Эпидемиология Восприимчивый коллектив – любой человек без специфического иммунитета. Группы риска работники животноводства, предприятий, обрабатывающих продукты, полученные от животных, ветеринары. В очагах бруцеллеза сезонный подъем заболеваемости людей связан с периодами отела, окота или опороса у животных.

Факторы патогенности бруцелл адгезины: микрокапсула белки наружной мембраны ферменты патогенности: – гиалуронидаза (придаёт высокую инвазивность) – нейраминидаза – каталаза и супероксиддисмутаза (защищают бруцелл от перекисей и других бактерицидных форм кислорода ) токсины: эндотоксин (ЛПС) агрессины : продукты, ингибирующие слияние фагосомы и лизосомы и подавляющие окислительный взрыв (незавершенный фагоцитоз) являются внутриклеточными паразитами клеток РЭС

Патогенез бруцеллёза Проникновение бруцелл через кожу и слизистые Попадание в регионарные л/у, размножение в макрофагах Проникновение в кровь, бактериемия и эндотоксинемия Гематогенная диссеминация в органы, богатые элементами РЭС: печень, селезёнка, костный мозг, л/у, почки Гематогенная диссеминация в органы, богатые элементами РЭС: печень, селезёнка, костный мозг, л/у, почки Формирование гранулём (специфические клеточные узелки) Периодически выход в кровь (бактериемия и эндотоксинемия), аллергизация макроорганизма (ГЗТ)

Клиника бруцеллёза острый бруцеллез - 1,5 – 2 месяца подострый бруцеллез - до 6 месяцев хронический бруцеллез - более 6 месяцев

Клиника острого и подострого бруцеллёза 1. Длительная волнообразная лихорадка (у большей части больных сочетается с ознобами), самочувствие остаётся хорошим 2. Проливные поты 3. Гепатоспленомегалия 4. Полилимфаденопатия 5.Артралгии, миалгии 6. Поражения ЦНС токсического характера: головная боль, утомляемость, нарушения сна и др. 7. Может быть розеолезная сыпь на коже

Клиника хронического бруцеллёза 1. Поражения опорно-двигательного аппарата: – артриты крупных суставов – сакроилеит – миозиты – бурситы – тендовагиниты 2. Поражения центральной и периферической нервной системы 3. Поражения половой системы: – орхит, эпидидимит у мужчин – сальпингит, оофорит, эндометрит, НМЦ у женщин 4. Может быть субфебрилитет

Лабораторная диагностика Бактериологическое исследование проводится в лабораториях ООИ Исследуемый материал – кровь (особенно во время лихорадки), костный мозг, моча, реже – желчь, испражнения, суставная жидкость. Методы диагностики : 1)Экспресс-метод – ПЦР – РИФ – ИФА

2)Бактериологический метод Низкая высеваемость возбудителя Медленный рост (инкубация от 5 до 30 суток) B. abortus требует 5 – 10 % СО 2 Материал засевают на: печёночный бульон (МПБ + настой из говяжьей печени): равномерное помутнение печёночный агар (МПА + настой из говяжьей печени): сероватые, мелкие, выпуклые, блестящие колонии (S- формы) кровяной агар

Колонии бруцелл на печеночном агаре

Колонии бруцелл на кровяном агаре

Мазок из колоний, окраска по Граму

Идентификация чистой культуры: – по биохимическим свойствам: ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты без газа не образуют индол для B. abortus образование H 2 S вариабельно B. melitensis не образует H 2 S B. suis образует H 2 S – по антигенным свойствам (РА) – по фаголизабельным свойствам – бактериостатические тесты Хеддельсона: основаны на бактериостатическом действии анилиновых красителей – фуксина и тионина : B. abortus растет на среде с фуксином, не растет с тионином B. suis растет на среде с тионином, не растет с фуксином B. melitensis растет на обеих средах

3) Биологический метод Заражают исследуемым материалом морских свинок и белых мышей. Вскрытие мышей – через 20 – 25 суток, морских свинок – через 30 – 35 суток. Изучают патологоанатомические изменения, проводят микроскопию мазков из органов, проводят бактериологическое исследование (20 – 25 дней).

4) Серологический метод – 1-ый основной Серодиагностика и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменять друг друга. Поэтому необходимо применять серодиагностику в комплексе с кожно- аллергической пробой. В первые 6 месяцев заболевания диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического; серологические реакции в этот период оказываются положительными почти в 98% случаев. По мере удлинения срока заболевания процент положительных серологических реакций (реакция агглютинации, РПГА) начинает падать. В поздние периоды заболевания большую диагностическую ценность имеет реакция Кумбса и внутрикожная аллергическая проба.

4) Серологический метод – 1-ый основной пластинчатая (качественная) РА – Хеддельсона развернутая (количественная) РА – Райта развернутая РПГА РСК ИФА нРИФ

Схема реакции Хеддельсона I 0,04 мл сыворотки пациента + 0,03 мл единого бруцеллёзного диагностикума IV контроль диагностикума (Кд) 0,03 мл единого бруцеллёзного диагностикума + 0,03 мл физ. раствора II 0,02 мл сыворотки пациента + 0,03 мл единого бруцеллёзного диагностикума V контроль сыворотки (Кс) 0,02 мл сыворотки пациента + 0,03 мл физ. раствора III 0,01 мл сыворотки пациента + 0,03 мл единого бруцеллёзного диагностикума

Единый бруцеллезный диагностикум содержит антигены трех патогенных для человека видов бруцелл (бруцеллы инактивированы нагреванием), подкрашен метиленовым синим. Используется для реакции Хеддельсона и Райта

Учет реакции Хеддельсона реакцию окончательно учитывают через 8 минут отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки - реакция «отрицательная» агглютинация только в первой дозе или в первой и второй дозах сыворотки - результат «сомнительный» агглютинация во всех дозах сыворотки - результат «положительный» при положительной реакции Хеддельсона ставят развёрнутую реакцию РА - Райта для определения титра АТ (диагностический титр 1:200)

При хроническом бруцеллёзе (более 6 месяцев) реакция агглютинации может быть отрицательной, т.к. у больного становится больше неполных АТ Для выявления неполных АТ ставится реакция Кумбса с использованием антиглобулиновой сыворотки против иммуноглобулинов человека

5) Метод кожно-аллергических проб – 2 -ой основной Кожно-аллергическая проба Бюрне основана на способности организма, сенсибилизированного бруцеллезным антигеном, специфически отвечать местной реакцией на внутрикожное введение бруцеллезного аллергена (ГЗТ). Реакция выявляется у больных позднее, чем антитела, и сохраняется годами после исчезновения клинических симптомов. Необходимо иметь в виду, что аллергическая реакция может быть положительной в случаях бессимптомной инфекции, а также у привитых живой бруцеллезной вакциной.

Для постановки пробы Бюрне используют бруцеллин. Бруцеллин – это нуклео-протеидный экстракт из бруцелл вакцинного штамма, полученный методом кислотного гидролиза. Вводится 0,1 мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечья. Учет реакции производится через часа. Результат считается положительным, если образуется инфильтрат и гиперемия размером не менее 2 см в диаметре.

Внутрикожное введение аллергена

Вакцина бруцеллёзная живая

аттенуированного содержит живые клетки B. abortus вакцинного (аттенуированного) штамма 19BA штамм получен американским учёным Беком путём многократных пересевов бруцелл на питательных средах при комнатной температуре. Учёная П.А. Вершилова доказала, что все 3 вида бруцелл создают перекрёстный иммунитет друг против друга используется для профилактики бруцеллёза по эпид. показаниям группам риска, ревакцинация – через 1 год

Вакцина бруцеллёзная лечебная

Классификация возбудителя туляремии 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Francisella вид F. tularensis (делится на биовары) 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Francisella вид F. tularensis (делится на биовары)

Морфологические и тинкториальные свойства Мелкие коккобактерии Грамотрицательные Образуют микрокапсулу Неподвижны Спор не образуют

Культуральные свойства прихотливы, на простых средах не растут желточные среды (свернутая желточная среда Мак-Коя) кровяной агар с добавлением глюкозы и цистеина (среда Френсиса) на агаре – беловатые, мелкие, выпуклые, блестящие колонии в жидких средах образуют плёнку

Биохимические свойства ферментирует глюкозу, мальтозу, маннозу с образованием кислоты без газа образует H 2 S Антигенные свойства О-антиген (ЛПС) Vi-антиген (поверхностно-оболочечный)

Классификация возбудителя туляремии 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Francisella вид F. tularensis (делится на биовары) 4 группа по Берджи семейство Brucellaceae род Francisella вид F. tularensis (делится на биовары)

Эпидемиология Источник инфекции Источник инфекции – животные, в основном – грызуны (суслики, ондатры, тарбаганы и др.) (зооноз).

Эпидемиология Пути передачи: Пути передачи: – контактный – трансмиссивный (комары, клещи, слепни и др.) – алиментарный и водный – воздушно-капельный Восприимчивый коллектив Восприимчивый коллектив – любой человек без специфического иммунитета. Группы риска: охотники, промысловики и др.

Факторы патогенности F. tularensis адгезины: микрокапсула белки наружной мембраны ферменты патогенности: – гиалуронидаза (придаёт высокую инвазивность) – нейраминидаза токсины: эндотоксин (ЛПС) агрессины : капсула вещества, подавляющие лизосомальную функцию фагоцитов (макрофагов) (незавершенный фагоцитоз)

Патогенез туляремии Проникновение через кожу и слизистые глаз, дыхательной и пищеварительной систем незавершённый фагоцитоз Размножение во входных воротах (первичный аффект) и регионарных л/у, незавершённый фагоцитоз, воспаление л/у (бубонная, язвенно-бубонная, глазо-бубонная, ангинозно- бубонная, абдоминальная, легочная формы ) незавершённый фагоцитоз Размножение во входных воротах (первичный аффект) и регионарных л/у, незавершённый фагоцитоз, воспаление л/у (бубонная, язвенно-бубонная, глазо-бубонная, ангинозно- бубонная, абдоминальная, легочная формы ) Нарушение барьерной функции л/у, проникновение в кровь, эндотоксикоз Гематогенная диссеминация, образование гранулём во внутренних органах и лимфоузлах (септическая форма) Гематогенная диссеминация, образование гранулём во внутренних органах и лимфоузлах (септическая форма)

Клиника туляремии Ангинозно - бубонная форма Язвенно – бубонная форма

Клиника туляремии: бубонная форма

Лабораторная диагностика Бактериологический и биологический методы проводятся в лабораториях ООИ Исследуемый материал – отделяемое язв, конъюнктивы глаза, пунктат бубона, плёнка из зева, мокрота, кровь. Методы диагностики : 1)Экспресс-метод – ПЦР – РИФ – ИФА

2)Бактериологический метод Проводится опосредованно через биологический!!! Заражают исследуемым материалом белых мышей и морских свинок. Животные погибают на 6 – 14 сутки, затем изучают патологоанатомические изменения, микроскопируют мазки из органов животных и проводят бактериологический метод

F. tularensis в мазке-отпечатке из селезёнки (окраска по Романовскому-Гимзе)

Посев материала от животных проводят на: желточные среды свернутая желточная среда Мак-Коя кровяной агар с добавлением глюкозы и цистеина (среда Френсиса) на агаре – беловатые, мелкие, выпуклые, блестящие колонии

Колонии францизелл на желточном агаре

Идентификация чистой культуры: – по биохимическим свойствам: ферментирует глюкозу, мальтозу, маннозу до кислоты без газа образует H 2 S – по антигенным свойствам: реакция агглютинации на стекле

3) Серологический метод – 1-ый основной развернутая РА развернутая РПГА РСК ИФА

4) Метод кожно-аллергических проб – 2 -ой основной Для постановки пробы используют тулярин Тулярин – это взвесь инактивированных нагреванием францизелл вакцинного штамма Вводится 0,1 мл внутрикожно в ладонную поверхность предплечья (есть тулярин для накожного применения) Учет реакции производится через часа Результат считается положительным, если образуется инфильтрат и гиперемия размером не менее 5 мм в диаметре У вакцинированных или переболевших людей проба остаётся положительной несколько лет. У больных проба становится положительной с 3 – 5 дня болезни

Вакцина туляремийная живая

аттенуированного содержит живые клетки F. tularensis вакцинного (аттенуированного) штамма штамм получен Н.А. Гайским и Б.Я. Эльбертом путём многократных пересевов францизелл на питательных средах Используется для профилактики туляремии по эпид. показаниям группам риска и лицам, проживающим на территории с природными очагами туляремии, ревакцинация – через 5 лет