Методы хроматографии. Ионообменная хроматография.

Михаил Семенович Цвет ( ) Разделение хлорофилла (1903) Здесь была открыта хроматография Аппаратура Цвета

История хроматографического анализа 1903 – первый доклад М.С.Цвета о разделении хлорофилла; 1931 – признание приоритета Цвета как создателя хроматографии в целом и адсорбционно- хроматографического анализа в частности; ионообменная хроматография ( Г.Шваб, США); тонкослойная хроматография (Н.А.Измайлов, М.С.Шрайбер, СССР); жидкостная распределительная хроматография как метод анализа смесей аминокислот (А.Мартин, Р.Синдж, Англия); бумажная хроматография (А.Мартин, Р.Синдж, Англия); первые публикации по газоадсорбционной хроматографии; А.Джеймс и А.Мартин создали газожидкостную хроматографию и предложили первую теорию разделения («теорию тарелок»); построен и применен в анализе первый газовый хроматограф.

История хроматографического анализа (продолжение) теория размывания хроматографических пиков ( Я. Ван Деемтер, А.Клинкенберг, Голландия); капиллярная газовая хроматография (М.Голэй, Франция); 1960-е годы - массовый выпуск газовых хроматографов, препаративная хроматография, хромато-масс-спектрометрия; первые жидкостные хроматографы высокого давления (Ш.Хорват, США, Г.Киркланд, Англия). Развитие метода ВЭЖХ; ионная хроматография (Х.Смолл, Т.Стивенс и В.Бауман, США); 1980–е годы - флюидная (сверхкритическая) хроматография; 1990-е годы – базы данных и системы компьютерной идентификации для хроматографического анализа.

Процесс разделения Сорбен т Элюент Элюат

Хроматографическое разделение основано на различии скоростей перемещения разных компонентов пробы через слой сорбента. Скорости движения компонентов в хроматографии теоретически не должны зависеть ни от концентрации сорбата, ни от состава пробы (природы и концентрации других компонентов). На практике эти положения иногда не выполняются, особенно при высокой концентрации компонентов и при вводе в колонку большой массы пробы. Это ведет к ошибочным результатам анализа.

Хроматография – это метод разделения и анализа смесей, основанный на многократном перераспределении компонентов смеси между двумя фазами при прохождении подвижной фазы (ПФ) через неподвижную (НФ). Хроматография является не только методом анализа, но и лежит в основе многих природных явлений и промышленных технологий, она позволяет вести глубокую очистку веществ (препаративные методы) и исследовать их свойства (например, измерять характеристики поверхности).

Основные области применения хроматографического анализа * нефтехимия и химическая промышленность; * контроль состояния окружающей среды; * анализ пищевых продуктов и лекарственных препаратов; * клинический анализ; * научные исследования.

Основные преимущества хроматографии как аналитического метода Высочайшая селективность Воспроизводимость результатов Многокомпонентность анализа Низкие пределы обнаружения (0.1 мкг/л) Широкий диапазон линейности ( мкг/л) Малый расход пробы ( < 1 мл) Экспрессность анализа Простота эксплуатации и возможность полной автоматизации

Классификация хроматографических методов

Ионообменная хроматография Ионообменная хроматография основана на способности компонентов анализируемой смеси вступать в обменные реакции с подвижными ионами адсорбента. В этом случае анализируемый раствор пропускают через хроматографическую колонку, заполненную мелкими зернами ионообменного вещества (ионитом) - катионитом или анионитом. Иониты представляют собой нерастворимые неорганические и органические высокомолекулярные соединения, содержащие активные группы. Подвижные ионы этих групп способны при контакте с растворами электролитов обмениваться на катионы или анионы растворенного вещества. В качестве ионитов применяют оксид алюминия (для хроматографии), сульфоуголь и разнообразные синтетические органические, ионообменные смолы.

Схема ионного хроматографа Емкость с элюентом Насос Кран ввода пробы Предколонка Разделяющая (аналитическая) колонка Система подавления фонового сигнала Детектор

Типичная установка ионообменной жидкостной хроматографии для очистки белков. После загрузки образца насос создает солевой градиент для элюции образца.

Иониты делят на: * катиониты, способные к катионному обмену; * аниониты способные к анионному обмену; *ионообменные вещества, обладающие амфотерными свойствами, т. е. способные и к анионному, и к катионному обмену.

Ионообменная хроматография Весьма эффективный метод определения любых ионов. Лучший метод определения неорганических анионов. Чувствительность нг/мл (без дополнительного концентрирования. Анионообменник Силасорб-S с нанесенным 6,10-ионеном. Колонка: 50x3 мм. Элюент: 0.3 мМ гидрофталат калия. Расход 1.0 мл/мин. УФ-детектор (λ=254 нм).

Применение ионообменной хроматографии Ионообменную хроматографию широко применяют в медицине, биологии, биохимии, для контроля окружающей среды, при анализе содержания лекарств и их метаболитов в крови и моче, ядохимикатов в пищевом сырье, а также для разделения неорганических соединений, в том числе радиоизотопов, лантаноидов, актиноидов и др. Анализ биополимеров (белков, нуклеиновых кислот и др.), на который обычно затрачивали часы или дни, с помощью ионообменной хроматографии проводят за мин с лучшим разделением. Применение ионообменной хроматографии в биологии позволило наблюдать за образцами непосредственно в биосредах, уменьшая возможность ȇ ре группировки или изомеризации, что может привести к неправильной интерпретации конечного результата. Интересно использование данного метода для контроля изменений, происходящих с биологическими жидкостями.

Аффинная хроматография Аффинная хроматография (от лат. affinis - родственный) (биоспецифич. хроматография, хроматография по сродству), метод очистки и разделения белков, основанный на их избирать. взаимод. с лигандом, ковалентно связанным с инертным носителем. В кач-ве лигандов используют соед., взаимод. которых с разделяемыми в-вами основано на биол. ф-ции последних. Так, при разделении ферментов (для чего преим. и применяется аффинная хроматография) лигандами служат их субстраты, ингибиторы или коферменты. Главная особенность, которая обусловливает высокую эффективность аффинной хроматографии, состоит в том, что разделение основано на различии не физ.-хим. признаков молекулы (заряда, формы и размера), а специфич. функциональных свойств, отличающих данный фермент от множества др. биополимеров.хроматографиялигандамикоферментыбиополимеров

Сверхкритическая флюидная хроматография В сверхкритической флюидной хроматографии (СФХ) подвижной фазой служит сверхкритический флюид – вещество, находящееся в сверхкритическом состоянии и имеющее показатели, промежуточные между характеристиками газов и жидкостей, благодаря тому, что находится при так называемой критической температуре Тс и критическом давлении Рс. Флюид Температ ура Т с, о С Давление р с, Па Плотн ость d c, г/см 3 СО 2 31,37,390,468 N2ОN2О36,57,270,457 NH 3 132,511,400,235 Метанол 239,48,100,272 н-Бутан 152,03,800,228 Дифтордихлор метан 111,84,120,558 Диэтиловый эфир 195,63,640,265 Наиболее важными характеристиками используемых в хроматографии подвижных фаз являются плотность, вязкость и коэффициент диффузии. Аномально высокая плотность сверхкритических флюидов обусловливает чрезвычайно высокую растворяющую способность в них большинства нелетучих веществ. Например, диоксид углерода в сверхкритическом состоянии растворяет н-алканы с числом С- атомов от 5 до 40, а также очень многие полициклические ароматические углеводороды.

Спасибо за внимание!!!