Молекулярно-биологическая характеристика белорусских штаммов Erwinia amylovora Научный руководитель: заведующий кафедрой молекулярной биологии, профессор, д.б.н. Евтушенков А.Н.

Erwinia amylovora Патогенная бактерия из семейства Enterobacteriacea. Инфицирует плодовые растения из семейства Розоцветные и вызывает бактериальный ожог. Недавно бактерия была обнаружена на территории нашей республики. Ущерб, причиняемый заболеванием измеряется садами…

Вот как это выглядит

Цели данной работы: сравнить штаммы Erwinia amylovora, amylovora, выделенные на территории Республики Беларусь, по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам; с помощью молекулярно-биологических методов провести генетический анализ штаммов Erwinia amylovora, amylovora, выделенных на территории Республики Беларусь; на основе полученных данных разработать методику быстрого и доступного диагностирования заболевания на ранних стадиях развития.

ЗАДАЧИ ЗАДАЧИ 1. Провести с обнаруженными штаммами микробиологические тесты; 2. С помощью молекулярно- биологических методов (ПЦР, выделение плазмидной ДНК и т.д.) охарактеризовать генетическую природу штаммов; 1. Провести с обнаруженными штаммами микробиологические тесты; 2. С помощью молекулярно- биологических методов (ПЦР, выделение плазмидной ДНК и т.д.) охарактеризовать генетическую природу штаммов;

3. С учетом литературных данных разработать методику быстрого и недорогого диагностирования заболевания на ранних стадиях; 4. Разработать методы борьбы с бактериальным ожогом плодовых. 3. С учетом литературных данных разработать методику быстрого и недорогого диагностирования заболевания на ранних стадиях; 4. Разработать методы борьбы с бактериальным ожогом плодовых.

МЕТОДЫ Микробиологические ряды Гиса; Микробиологические ряды Гиса; Ряд других микробиологических тестов; Ряд других микробиологических тестов; Полимеразная цепная реакция; Полимеразная цепная реакция; Секвенирование по методу Сенгера с мечеными праймерами; Секвенирование по методу Сенгера с мечеными праймерами; Выделение хромосомальной ДНК с применением STAB; Выделение хромосомальной ДНК с применением STAB; Выделение плазмидной ДНК. Метод щелочного лизиса; Выделение плазмидной ДНК. Метод щелочного лизиса;

РЕЗУЛЬТАТЫ 1. Из всех штаммов была выделена типовая плазмида pEA29

2. Был проведен микробиологический анализ белорусских штаммов E.amylovora. Полученные характеристики соответствуют тому, что эти штаммы принадлежат к европейской расе. В основном по имеющимся штаммам и литературным данным наши штаммы обладают теми же характеристиками, что и европейские. 3. Данные сиквенса 16S рДНК и сравнение полученных данных с представленными в базе данных BLAST показали, что штаммы из Беларуси незначительно отличаются последовательностью 16S рДНК от других и от украинского и немецкого.

4. Тест на устойчивость к антибиотикам показал, что все штаммы проявляют устойчивость к ампициллину, тетрациклину, хлорамфениколу, налидиксовой кислоте. Все штаммы, кроме типового немецкого 1\79, неустойчивы к стрептомицину. 5. Тест на устойчивость к фунгицидам показал, что все штаммы чувствительны к азофоску (100 г/л), ПСК (200 г/л), медному купоросу (10 г/л), инкрасепту (10 г/л), железному купоросу (100 г/л).

Положения, выносимые на защиту Белорусские штаммы Erwinia amylovora по биохимическим характеристикам схожи с украинским и немецким и другими европейскими штаммами; Белорусские штаммы Erwinia amylovora по биохимическим характеристикам схожи с украинским и немецким и другими европейскими штаммами; Белорусские штаммы E.amylovora принадлежат к европейской расе; Белорусские штаммы E.amylovora принадлежат к европейской расе; Быстрым и недорогим способом диагностики бактериального ожога на ранних этапах развития является ПЦР–анализ; Быстрым и недорогим способом диагностики бактериального ожога на ранних этапах развития является ПЦР–анализ; Некоторые фунгициды можно применять в качестве средств профилактики и борьбы с заболеванием; Некоторые фунгициды можно применять в качестве средств профилактики и борьбы с заболеванием;

Erwinia amylovora Грам-отрицательная палочка. Имеет жгутики. Колонии на плотной питательной среде круглые, глянцевые. Имеет систему секреции белка III типа, за счет которой бактерия заражает растение. систему секреции белка III типа систему секреции белка III типа

Система секреции III типа