Комплексное исследование антибактериальных свойств гигиенических средств Автор: кадет 11 класса Кирповский Александр Автор: кадет 11 класса Кирповский Александр Руководители: Гореликова Е.В. учитель географии и биологии Руководители: Гореликова Е.В. учитель географии и биологии Роор Н.В. учитель химии и биологии КМКК Роор Н.В. учитель химии и биологии КМКК Консультант: Юрченко О.Н Врач –бактериолог территориального отдела Управления Роспотребнадзора по Красноярскому краю в городе Канске Краевое государственное бюджетное общеобразовательное учреждение кадетская школа-интернат «Канский морской кадетский корпус»

Цель: Исследование некоторых гигиенических средств по химико-биологическим показателям.Исследование некоторых гигиенических средств по химико-биологическим показателям. 2

Задачи: 1. Изучить микрофлору человека и её функции по литературным источникам.1. Изучить микрофлору человека и её функции по литературным источникам. 2. Подобрать гигиенические средства и изучить их химический состав на основе информации с упаковок.2. Подобрать гигиенические средства и изучить их химический состав на основе информации с упаковок. 3. Подобрать методики лабораторного изучения бактерий.3. Подобрать методики лабораторного изучения бактерий. 4. Провести эксперимент на выявление эффективности антибактериальных свойств гигиенических средств по химико-биологическим показателям.4. Провести эксперимент на выявление эффективности антибактериальных свойств гигиенических средств по химико-биологическим показателям. 5. Сделать выводы о эффективности антибактериальных средств.5. Сделать выводы о эффективности антибактериальных средств. 3

Объект исследования Эффективность антибактериальных средств Эффективность антибактериальных средств Предмет исследования: Состав антибактериальных средств 4

Практическая часть Используя микробиологический метод исследования определить эффективность действия антибактериальных гигиенических средств на микрофлору кожи рук Используя микробиологический метод исследования определить эффективность действия антибактериальных гигиенических средств на микрофлору кожи рук Цель: 5

Исследуемые гигиенические средства: «Ника», «Absolut classic», «Детское мыло», «Хозяйственное мыло», «Sanitell», Антибактериальные влажные салфетки «Русалочка», «Сарма», «Туалетное мыло»«Ника», «Absolut classic», «Детское мыло», «Хозяйственное мыло», «Sanitell», Антибактериальные влажные салфетки «Русалочка», «Сарма», «Туалетное мыло» 6

Условия проведения исследования В исследования принимал участие 1 человек, интервал времени перед забором биоматериала (смыва с рук) составил 3,5-4 часа после утреннего душа. Забор смывов с рук проводился в помещении, оборудованном локтевым краном. В исследования принимал участие 1 человек, интервал времени перед забором биоматериала (смыва с рук) составил 3,5-4 часа после утреннего душа. Забор смывов с рук проводился в помещении, оборудованном локтевым краном. *Участие большего количества участников не возможно в связи с дороговизной исследований.*Участие большего количества участников не возможно в связи с дороговизной исследований. 7

Правила забора смыва с рук. Правила забора смыва с рук. Взятие проб осуществляли методом смывов. Тампоны перед забором увлажнили, поместили их в пробирки содержащие 2,0 мл. изотонического раствора натрия хлорида.Взятие проб осуществляли методом смывов. Тампоны перед забором увлажнили, поместили их в пробирки содержащие 2,0 мл. изотонического раствора натрия хлорида. Вначале с правой руки, с участков меньшей загрязнённости – протёрли тыльную сторону руки от кисти к пальцам, затем тщательно протёрли ладони, межпальцевые пространства и под ногтевые ложа.Вначале с правой руки, с участков меньшей загрязнённости – протёрли тыльную сторону руки от кисти к пальцам, затем тщательно протёрли ладони, межпальцевые пространства и под ногтевые ложа. 8 Фото 1 Стерильные ватные тампоны

Фото 2 Взятие мазков с ладоней Фото 3 Взятие мазков из- под ногтевого ложа 9

Показатели эффективности гигиенических средств Показатели эффективности гигиенических средств При проведении практической работы для оценки эффективности действия гигиенических средств использовали следующие показатели: При проведении практической работы для оценки эффективности действия гигиенических средств использовали следующие показатели: 1) общее количество бактерий; 1) общее количество бактерий; 2) наличие БГКП (как показатель фекального загрязнения); 2) наличие БГКП (как показатель фекального загрязнения); 3) наличие Staphylococcus aureus. 3) наличие Staphylococcus aureus. 10

Первый день исследования 1. Забор смывов с грязных рук.1. Забор смывов с грязных рук. 2. Обработка рук моющим средством, салфетками или антисептическим гелем.2. Обработка рук моющим средством, салфетками или антисептическим гелем. 3. Забор смывов с чистых рук.3. Забор смывов с чистых рук. 4. Повторная обработка рук моющим средством, салфетками или антисептическим гелем.4. Повторная обработка рук моющим средством, салфетками или антисептическим гелем. 5. Повторный забор смывов с чистых рук.5. Повторный забор смывов с чистых рук. 6. Взятые смывы с рук засеивали на плотные среды разлитые в чашки Петри. Для проведения исследований использовались среда Эндо, ЖСА, МПА. Тампон с посевным материалом вносили в слегка приоткрытую чашку и круговыми движениями втирали его содержимое в поверхность среды, вращая при этом тампон. Посевы помещали в термостат и инкубировали при температуре 37.0 С в течение 24 часов.6. Взятые смывы с рук засеивали на плотные среды разлитые в чашки Петри. Для проведения исследований использовались среда Эндо, ЖСА, МПА. Тампон с посевным материалом вносили в слегка приоткрытую чашку и круговыми движениями втирали его содержимое в поверхность среды, вращая при этом тампон. Посевы помещали в термостат и инкубировали при температуре 37.0 С в течение 24 часов. 11

Фото 4 Питательные среды Фото 6 Термостат Фото 5 Помещение в термостат 12

Колонии на МПА 1. Чашки с посевами вынули из термостата. На МПА используя маркер, произвели подсчёт колоний определили общую микробную обсеменённость.1. Чашки с посевами вынули из термостата. На МПА используя маркер, произвели подсчёт колоний определили общую микробную обсеменённость. Визуально изучили выросшие на чашках с МПА колонии.Визуально изучили выросшие на чашках с МПА колонии. Из разных по цвету, форме и размеру колоний приготовили микропрепараты и окрасили их по Граму.Из разных по цвету, форме и размеру колоний приготовили микропрепараты и окрасили их по Граму. В окрашенных препаратах определили грам+ кокки…. и палочки… -нормальнаяВ окрашенных препаратах определили грам+ кокки…. и палочки… -нормальная 13 Фото 7 Общая обсеменённость КОЕ Окраска по Граму

Колонии на МПА

в цифровой микроскоп Фото 12 Диплококки в цифровой микроскоп 15

Колонии в микроскопе

Колонии на ЖСА Рассматриваем посевы выросшие на ЖСА. Чашки с выросшими колониями на ЖСА оставили на 24 часа при комнатной температуре для выявления пигмента. На чашке с ЖСА оставленной при комнатной температуре Staphylococcus aureus образует золотистый пигмент. Фото 8 Staphylococcus aureus

Колонии на ЖСА Подозрительные колонии в отношении стафилококка, отсеивали на скошенный агар (среду Клиглера), при этом учитывали наличие лецитиназы( фермента агрессии), которое проявляется в образовании радужного венчика вокруг колонии.Подозрительные колонии в отношении стафилококка, отсеивали на скошенный агар (среду Клиглера), при этом учитывали наличие лецитиназы( фермента агрессии), которое проявляется в образовании радужного венчика вокруг колонии. Фото Подозрительные колонии

Фото 11 Staphylococcus aureus в цифровой микроскоп 19

Фото 9 Микроскопия Фото 10 Готовый мазок с выращенной культурой

Изучение колоний на среде Клиглера Изучение колоний на среде Клиглера Вынули посевы из термостата. Из выделенных на скошенный агар культур сделки мазки, окрасили по Граму и микроскопировали. Обнаружили Грам+ стафилококки и провели дальнейшее исследование:Вынули посевы из термостата. Из выделенных на скошенный агар культур сделки мазки, окрасили по Граму и микроскопировали. Обнаружили Грам+ стафилококки и провели дальнейшее исследование: а) определили ферментацию маннита в анаэробных условиях;а) определили ферментацию маннита в анаэробных условиях; б) определили ферментацию глюкозы в анаэробных условиях; б) определили ферментацию глюкозы в анаэробных условиях; в) поставили реакцию плазма коагуляции. в) поставили реакцию плазма коагуляции. 21

Изучение колоний на среде Клиглера Изучение колоний на среде Клиглера Провели учёт результатов.Провели учёт результатов. Свойства Staphylococcus aureus: лецитиназа +, расщепления маннита +, реакцию плазма коагуляции +, золотистый пигмент +.Свойства Staphylococcus aureus: лецитиназа +, расщепления маннита +, реакцию плазма коагуляции +, золотистый пигмент +. Наличие перечисленных признаков позволяет дифференцировать Staphylococcus aureus от стафилококков других видов. Наличие перечисленных признаков позволяет дифференцировать Staphylococcus aureus от стафилококков других видов. 22

Вывод по исследованию Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus на ЖСА был обнаружен только после смывов с грязных рук, перед обработкой «Ника», «Absolut classic», «Детское мыло», «Антибактериальные влажные салфетки «Русалочка», «Сарма», после первичной обработки роста колоний не наблюдалось, что доказывает необходимость обязательного мытья рук гигиеническим средством.

Колонии на Эндо Делали посевы на среде Эндо для изучения БГКПДелали посевы на среде Эндо для изучения БГКП При проведении практической работы рост микроорганизмов не наблюдался.При проведении практической работы рост микроорганизмов не наблюдался. Следовательно Бактерий группы кишечной палочки не обнаружено.Следовательно Бактерий группы кишечной палочки не обнаружено.

Наименование Общая микробная обсеменённость Наличие S. aureus Эффект ивн ост ь (%) Эффекти внос ть(п осле втор и личной обработки рук) Призовые места по эффективности Грязные руки Чистые руки Чистые руки (повторная обработка) Грязные рук и Чистые р у к и Чистые повторная (обработка рук) 1«Ника» ,698,81 2«Absolut classic» антибакт ,465,01 3«Детское мыло» ,446,3 4«Хозяйственное мыло» ,164,9 5«Sanitell» ,496,22 6«Русалочка» ,689,43 7«Сарма» хоз антибактер ,273,06 8«Туалетное мыло» антибакт ,976,9

Заключение При проведении практической работы исследовано 48 проб (смывов с рук) от одного обследуемого, в ходе эксперимента была изучена антибактериальная эффективность 8 различных моющих и других гигиенических средств. При проведении практической работы исследовано 48 проб (смывов с рук) от одного обследуемого, в ходе эксперимента была изучена антибактериальная эффективность 8 различных моющих и других гигиенических средств. По результатам исследования наибольшую эффективность, даже при первичной обработке, показало мыло жидкое с дезинфицирующим эффектом кожный антисептик «Ника» (97,6 – 98,8%). Мыло удобно в обращении, имеет подробную инструкцию к применению и назначению, обозначен состав, указаны антибактериальные вещества. Недостатки нельзя использовать детям, большая ёмкость. По результатам исследования наибольшую эффективность, даже при первичной обработке, показало мыло жидкое с дезинфицирующим эффектом кожный антисептик «Ника» (97,6 – 98,8%). Мыло удобно в обращении, имеет подробную инструкцию к применению и назначению, обозначен состав, указаны антибактериальные вещества. Недостатки нельзя использовать детям, большая ёмкость. На втором месте по эффективности спиртосодержащий гель «Sanitell» (93,4-96,2%). На втором месте по эффективности спиртосодержащий гель «Sanitell» (93,4-96,2%). 26

Третье почётное место занимают антибактериальные салфетки «Русалочка» (70,6-89,4%). Гель и салфетки удобны в применении, на этикетки обозначен состав и указаны антибактериальные вещества. Можно рекомендовать использовать в дороге, путешествиях.Третье почётное место занимают антибактериальные салфетки «Русалочка» (70,6-89,4%). Гель и салфетки удобны в применении, на этикетки обозначен состав и указаны антибактериальные вещества. Можно рекомендовать использовать в дороге, путешествиях. Четвертое место по праву можно отдать «Хозяйственному мылу» (53,-64,9%), самый наименьший процент показало «Детское мыло» (19,4%).Четвертое место по праву можно отдать «Хозяйственному мылу» (53,-64,9%), самый наименьший процент показало «Детское мыло» (19,4%). Другие моющие средства (мыло «Absolut classic», «Сарма», «Туалетное мыло») показали приблизительно одинаковые результаты, их эффективность колеблется в пределах от 42,9% до 48,5% при первичной обработки, повторная обработка рук повышает процент эффективности с 65,01% до 76,9%. Другие моющие средства (мыло «Absolut classic», «Сарма», «Туалетное мыло») показали приблизительно одинаковые результаты, их эффективность колеблется в пределах от 42,9% до 48,5% при первичной обработки, повторная обработка рук повышает процент эффективности с 65,01% до 76,9%. Загрязнение кожи способствует переносу патогенных, условно- патогенных микроорганизмов и при определённых условиях может вызвать заболевание, поэтому очень важно постоянно поддерживать чистоту кожи. Соблюдение элементарных правил гигиены может снижать количество бактерий на 90%. Загрязнение кожи способствует переносу патогенных, условно- патогенных микроорганизмов и при определённых условиях может вызвать заболевание, поэтому очень важно постоянно поддерживать чистоту кожи. Соблюдение элементарных правил гигиены может снижать количество бактерий на 90%.