БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Кафедра фармации ДИПЛОМНАЯ РАБОТА НА ТЕМУ: МЕХАНИЗМЫ ИММУНОДЕПРЕССИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ВИРУСА ГРИППА А Выполнил: студент 5-го курса Кащей Сергей Леонидович Научный руководитель: к.б.н., доцент Семенкова Г. Н. Минск 2008

ВВЕДЕНИЕ Развитие вирусных инфекций у животных и человека сопровождается изменением иммунологической реактивности организма. Модуляция иммунного ответа под действием вируса проявляется в изменении ряда характеристик иммунных клеток. Например, установлено, что вирусы подавляют способность нейтрофилов и макрофагов к фагоцитозу. Некоторые типы вирусов, в том числе и вирус гриппа, уменьшают пролиферативную активность лимфоидных клеток. Развитие вирусных инфекций у животных и человека сопровождается изменением иммунологической реактивности организма. Модуляция иммунного ответа под действием вируса проявляется в изменении ряда характеристик иммунных клеток. Например, установлено, что вирусы подавляют способность нейтрофилов и макрофагов к фагоцитозу. Некоторые типы вирусов, в том числе и вирус гриппа, уменьшают пролиферативную активность лимфоидных клеток. Нейтрофилы не являются основным звеном противовирусного иммунитета, однако именно эти клетки отвечают за ранние этапы проявления иммунитета и выполняют важную роль в процессах защиты организма. Как известно, фагоцитарная активность клеток сопряжена с активацией их ферментными системами молекулярного кислорода. Это дает основания предположить, что одним из механизмов проявления иммунодепрессивного действия вируса гриппа является модификация кислородактивирующих систем клеток. Взаимодействие нейтрофилов с вирусом гриппа является достаточно сложным и приводит к необратимым изменениям в функционировании клеток. Однако роль кислород генерирующих редокс-систем нейтрофилов в процессе инфицирования вирусом гриппа А до конца не выяснена. Нейтрофилы не являются основным звеном противовирусного иммунитета, однако именно эти клетки отвечают за ранние этапы проявления иммунитета и выполняют важную роль в процессах защиты организма. Как известно, фагоцитарная активность клеток сопряжена с активацией их ферментными системами молекулярного кислорода. Это дает основания предположить, что одним из механизмов проявления иммунодепрессивного действия вируса гриппа является модификация кислородактивирующих систем клеток. Взаимодействие нейтрофилов с вирусом гриппа является достаточно сложным и приводит к необратимым изменениям в функционировании клеток. Однако роль кислород генерирующих редокс-систем нейтрофилов в процессе инфицирования вирусом гриппа А до конца не выяснена.

Цель работы Целью настоящей работы явилось изучение влияния вируса гриппа А на процессы образования активных форм кислорода (АФК) на начальных стадиях взаимодействия с нейтрофилами крови человека. Целью настоящей работы явилось изучение влияния вируса гриппа А на процессы образования активных форм кислорода (АФК) на начальных стадиях взаимодействия с нейтрофилами крови человека.

Методы Нейтрофилы изолировали из крови здоровых людей по стандартной методике. Нейтрофилы изолировали из крови здоровых людей по стандартной методике. Генерацию АФК и активность миелопероксидазы изучали методом люминол зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) с применением биохемилюминометра БХЛ-1 (Минск, Беларусь) Генерацию АФК и активность миелопероксидазы изучали методом люминол зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) с применением биохемилюминометра БХЛ-1 (Минск, Беларусь) Секреторную дегрануляцию нейтрофилов изучали методом оценки уровня активности лизоцима (спектрофотометрическийй) Секреторную дегрануляцию нейтрофилов изучали методом оценки уровня активности лизоцима (спектрофотометрическийй) Изучение вклада различных типов АФК в ЛЗХЛ проводили с использованием специфических перехватчиков и ингибиторов ферментов Изучение вклада различных типов АФК в ЛЗХЛ проводили с использованием специфических перехватчиков и ингибиторов ферментов

Типичные кинетические кривые ЛЗХЛ нейтрофилов при добавлении вируса гриппа А на 15-й минуте измерения (3) и перед измерением (2). (1)- контрольная кривая (в отсутствие вируса)

Кинетические кривые хемилюминесценции в системе «люминол (5 ·10-5 моль/л)–пероксид водорода (2,5 ·10-3 моль/л) – МПО». Стрелкой указан момент добавления вируса гриппа А (8,7·105 бое/мл), где 1 – МПО, 2 – МПО+Вирус

Влияние вируса гриппа А и таурина на хемилюминесценцию в системе «люминол (5 ·10 -5 моль/л) гипохлорная кислота (6,8·10 -5 моль/л)»

Влияние вируса гриппа А на активность МПО (А) и секрецию лизоцима (Б)

Влияние вируса гриппа на генерацию АФК при адгезии нейтрофилов в присутствии и без неоптерина и 7,8-дигидронеоптерина. Клетки инкубировали с птеридинами 5 минут. Вирус добавляли на 5-й минуте измерения

Влияние перехватчиков АФК на пероксдазоподобную реакцию вируса 1 – контроль, 2 – СОД, 3 – DABCO, 4 – маннит, 5 – PTIO Стрелкой указан момент добавления пероксида водорода

Влияние неоптерина и 7,8-дигидронеоптерина на пероксидазоподобную реакцию вируса 1 – неоптерин, 2 – контроль, 3 – 7,8-дигидронеоптерин Стрелкой указан момент добавления пероксида водорода

Контроль, %Неоптерин, % К100 ± 5180 ± 9 SOD ( моль/л)92 ± 598 ± 5 DABCO ( моль/л)64 ± 3116 ± 6 маннит ( моль/л)46 ± 290 ± 5 PTIO ( моль/л)102 ± 5123 ± 6 Влияние перехватчиков АФК на пероксидазоподобную реакцию вируса в присутствии и без неоптерина (максимальная интенсивность)

Заключение На начальных этапах взаимодействия вируса гриппа А с нейтрофилами модифицируются кислород активирующие системы этих клеток. На начальных этапах взаимодействия вируса гриппа А с нейтрофилами модифицируются кислород активирующие системы этих клеток. Уменьшение продукции АФК при добавлении вируса к адгезирующим нейтрофилам связано с его ингибирующим действием на миелопероксидазу. Уменьшение продукции АФК при добавлении вируса к адгезирующим нейтрофилам связано с его ингибирующим действием на миелопероксидазу. Ингибирование активности миелопероксидазы при добавлении вируса гриппа обусловлено его способностью утилизировать гипохлорит, препятствуя таким образом нормальному функционированию фермента. Ингибирование активности миелопероксидазы при добавлении вируса гриппа обусловлено его способностью утилизировать гипохлорит, препятствуя таким образом нормальному функционированию фермента. Вирус гриппа снижает в нейтрофилах интенсивность процессов секреторной дегрануляции. Вирус гриппа снижает в нейтрофилах интенсивность процессов секреторной дегрануляции. Вирус гриппа А индуцирует хемилюминесценцию, обусловленную образованием синглетного кислорода и гидроксильных радикалов. Неоптерин повышает, а 7,8-дигидронеоптерин полностью ингибирует процесс образования АФК в пероксидазоподобной реакции вируса. Вирус гриппа А индуцирует хемилюминесценцию, обусловленную образованием синглетного кислорода и гидроксильных радикалов. Неоптерин повышает, а 7,8-дигидронеоптерин полностью ингибирует процесс образования АФК в пероксидазоподобной реакции вируса. Присутствие птеридинов (неоптерина и 7,8-дигидронеоптерина) в суспензии нейтрофилов не приводит к изменению кислородактивирующего отклика клеток при действии вируса гриппа А. Присутствие птеридинов (неоптерина и 7,8-дигидронеоптерина) в суспензии нейтрофилов не приводит к изменению кислородактивирующего отклика клеток при действии вируса гриппа А.

Спасибо за внимание!